人骨骼肌细胞永生化
骨骼肌细胞(Skeletal muscle cells)是人和动物体内最大的细胞之一，它们是由成 肌细胞(Myoblasts)融合而来的多核细胞，故骨骼肌的形成是一个非常复杂的过程， 并需要多种细胞信号通路的参与，包括 phosphatidylinositol 3-kinase， calcineurin，STAT3 和 MAPK 等。原代骨骼肌细胞的培养是研究细胞分化过程的有 效的模型。该产品肌动蛋白（α-actin）免疫荧光染色为阳性免疫荧光鉴定，细胞纯度可达90%以上，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
产品详情
组织来源
人的正常肌肉组织
形态特征
贴壁培养
细胞污染
HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。
培养条件
原代骨骼肌细胞培养体系
生长特性
长梭状细胞
特征特性
骨骼肌细胞（Skeletal muscle cells）是人和动物体内最大的细胞之一，它们是由成肌细胞(Myoblasts)融合而来的多核细胞，故骨骼肌的形成是一个非常复杂的过程，并需要多种细胞信号通路的参与，包括phosphatidylinositol 3-kinase，calcineurin，STAT3和MAPK等。原代骨骼肌细胞的培养是研究细胞分化过程的有效的模型。该细胞通过慢病毒转染的方式携带SV40基因。
细胞冻存步骤
待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。明舟生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
复苏细胞步骤
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
细胞传代步骤
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。