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永生化细胞是一种在理化刺激、基因突变、病毒感染等外界刺激下， 可以在体外无限增殖的不衰老细胞株。细胞永生化机制有放射性因素、端粒-端粒酶激活、病毒基因转染及抑癌基因受抑制等学说。胞永生化是指细胞在体外培养的过程中，由于自身基因变化或者外界各种刺激因素，避免了正常细胞的衰老死亡过程， 可以长期传代培养、无限分裂增殖。
永生化细胞系稳定均一，性状一致，是体外研究增殖、分化、凋亡、衰老等生物学过程的理想模型；可使得传代困难，增殖困难、易衰老的细胞获得永生，并且永生化的细胞壁原代细胞易于培养，因为它们生长能力更强可以获得更多的细胞资源，也节省了分离细胞的周期，降低反复分离原代细胞的成本；永生化细胞可建立稳定的细胞库，遗传相同的种群，有助于提供一致且可复制的实验结果。
永生化就是通过细胞自身的基因变化或外界的各种刺激因素，使正常的细胞突破了正常的细胞衰老，延长了其复制能力，甚至使细胞无限增殖的过程。正常细胞在体外的增殖次数是有限的。永生化正是利用细胞自发的，或通过转基因或其他刺激等使细胞能顺利突破增殖次数的限制，减少科研工作者从组织中分离原代细胞的次数的一种手段。理论上，永生化是可以让细胞获得无限增殖的能力，但在实际操作中，可能会因为细胞的来源、类型、所选用的基因是否合适等情况，而使所获得的“永生化”细胞未能获得无限增殖的能力。所以实际中还是需要去测试才知道传代效果。
贴壁细胞传代操作步骤
用移液管或者巴氏吸管吸取培养液；使用不含钙镁离子的平衡盐溶液（PBS）冲洗细胞1-2次；
弃PBS，加入胰蛋白酶-EDTA消化液（消化液浓度根据各细胞不同有调整），轻轻摇晃培养瓶，使胰酶与细胞表面充分接触，37 ℃孵育2-3 min，加入含血清完全培养基终止消化。
将细胞悬液移入离心管中，800 rpm-1000rpm离心5min，弃上清，加入预热的完全培养基重悬细胞，轻轻吸打混匀，吹打过程中尽量不要出现气泡。
细胞计数，根据细胞量选择合适的传代比例，最后转移置37 ℃细胞培养箱中进行培养。
悬浮细胞传代操作步骤
悬浮细胞由于本身在生长培养基中悬浮，无需通过酶的作用使其从培养容器表面脱离，整个过程较为迅速，对细胞损伤较小。悬浮细胞传代，通常有两种方法，直接传代法和离心传代法。
1）直接传代法
① 悬浮细胞长满至80%-90%左右（细胞悬液变黄，最大细胞密度随细胞系不同而有所差异），即可传代；
② 用吸管吸弃细胞悬液1/2～2/3；
③ 加入适量的新鲜培养基，继续培养。
（2）离心传代法
① 将细胞悬液转移到离心管内；
② 800 rpm-1000rpm离心5min，弃上清；
③ 使用新鲜的培养基重悬细胞；
④ 吸管吸取适量细胞悬液，装入新的培养瓶，再加入适量的新鲜培养基，继续培养。
细胞冻存是指将细胞放在低温环境，以达到减少细胞代谢的作用，从而达到对细胞进行长期储存进行保种的目的，以供后续实验或临床使用。细胞冻存一般采用慢冻原则，慢冻可使细胞逐步脱水，细胞不会因为产生大的冰晶而收到损害。