人风湿性关节滑膜成纤维细胞永生化
人风湿关节炎滑膜成纤维细胞分离自滑膜组织;类风湿关节炎(RA)是一种病因未明的慢 性、以炎性滑膜炎为主的系统性疾病。其特征是手、足小关节的多关节、对称性、侵袭性关 节炎症，经常伴有关节外器官受累及血清类风湿因子阳性，可以导致关节畸形及功能丧失。 本公司生产的永生化人风湿关节炎滑膜成纤维细胞采用胰蛋白酶和胶原酶混合消化和 SV40T 制备而来，细胞总量约为 5×105 个/瓶，细胞经 Vimentin 免疫荧光鉴定，细胞纯 度可达 85%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
产品详情
细胞数量
1*10^6
组织来源
风湿性关节滑膜
细胞污染
HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。
培养基
风湿性关节滑膜成纤维细胞专用培养基
培养条件
Atmosphere: Air, 95%; CO2, 5%。Temperature: 37℃
细胞运输
干冰运输(2ml冻存管)或活细胞运输（T25细胞瓶）
细胞冻存
Freeze medium: FBS/NBS, 92%;DMSO, 8%（for reference）Storage temperature: liquid nitrogen vapor phase
细胞传代步骤
如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞复苏步骤
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
细胞冻存步骤
待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例；1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。